La biblioteca si compone di 18.013 volumi a stampa (l'inventario è in corso di aggiornamento), di cui circa 60 incunaboli, 2000 cinquecentine, numerosi volumi del '600 e '700 e infine 374 manoscritti.

Frutto della fusione dell'antica biblioteca dell'Ospedale di Santo Spirito e di quella, assai più consistente, donata da Giovanni Maria Lancisi nel 1711, la Biblioteca Lancisiana è specializzata in storia della medicina e delle scienze naturali.

I volumi ivi conservati contengono opere e consulti del Lancisi, opere dell'insigne medico e chirurgo del secolo XVII Marco Aurelio Severino , ed altre mediche e scientifiche che datano dal secolo XIV in avanti. Ai volumi di argomento medico si aggiungono manoscritti e libri a stampa contenenti opere di letteratura e filosofia, riviste di argomento letterario e scientifico, volumi relativi alla storia dell'assistenza sanitaria a Roma ed in particolare all'Ospedale di Santo Spirito.

La Biblioteca per problemi organizzativi ha conosciuto un lungo periodo di confusione, con ovvie conseguenze per la consultazione. La catalogazione dei manoscritti, realizzata per circa un terzo (i manoscritti sono 374) e l'inventariazione dei volumi a stampa recentemente avviata, consentiranno non solo di venire a conoscenza dell'esatta entità del patrimonio librario custodito presso questa biblioteca, ma permetterà anche l'accesso catalografico all'intero patrimonio bibliografico.